• 熱線電話:010-56107385

聯系方式

地 址:北京市昌平區北清路生命科學園博雅CC -9號樓2層
電 話:010-56107385
傳 真:
郵 箱:support@ori-gene.cn

科研動態

您現在的位置:首頁 > 公司動態 > 科研動態
前列腺癌研究新進展:雄激素受體共激活因子BAP18
作者: 來源: 發布于:2017-5-31 14:41:52 點擊量:

    與源宜基因合作的中國醫科大學客戶在Nucleic Acids Research 上發表了題為:BAP18 coactivates androgen receptor action and promotes prostate cancer progression的文章!下面我們一起看看這篇文章

 

研究背景

有研究發現18 kDa的 BPTF相關蛋白(BAP18)是mll1-wdr5復合體組成成分。然而,BAP18是一個未知的蛋白質,BAP18詳細的生物學功能和作用機制還不明確。雄激素受體是轉錄因子的一員,在前列腺癌(PCA)和去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)的進展中起重要作用。

 

材料和方法

    果蠅,合成雄激素(DHT)處理前后的22Rv1細胞,HEK293細胞

    免疫共沉淀(Co-IP);RNA-seqqPCR等

 

研究結果

Ø 在果蠅實驗中CG33695作為雄激素受體的共激活劑

    許多研究表明,AR輔調節因子在AR介導的轉錄中發揮發揮重要的生物學功能。使用araf-1相關PEV(araf-1-pev模型)在果蠅的實驗系統,我們已經分離出幾種已知的蛋白質,這些蛋白的功能是作為雄激素受體共同調控者,通過不同的分子機制參與雄激素受體調控過程。

    在這項研究中,我們分離和鑒定出一個未知功能蛋白,cg33695 參與調節果蠅 ARAF-1介導的轉錄活性。GFP報告基因的表達系統中,cg33695功能損失的兩突變體(cg33695k07716,cg33695dg06604)分別使ARAF-1介導的轉錄活性下降,這表明在果蠅中cg33695與雄激素受體相關。為了證實這一結果,對人類同源cg33695進行果蠅轉基因,我們觀察到cg33695或c17orf49在眼盤中增強GFP ARAF-1介導的轉錄,四個物種BAP18具有很高的的同源性,包含一個保守的SANT域,這個結構域與染色質相關蛋白或轉錄因子相關(圖1)。

  

圖1. BAP18增強果蠅中ARAF-1介導的轉錄

Ø BAP18與激素受體體內互作

    為了研究人類同源cg33695(BAP18)AR誘導的轉錄的影響,利用免疫共沉淀(Co-IP)實驗檢測BAP18和AR的相互作用,AR和FLAG標記BAP18表達質粒共轉染HEK293細胞,研究結果表明,在AR配體(DHT)存在時AR和BAP18之間的相互作用更強(圖2B)。

    免疫熒光實驗結果表明,無論是否經過AR配體處理,BAP18都位于核區,BAP18與AR一起分布在DHT處理的細胞核(圖2e)。

   

圖2.BAP18與激素受體體內互作

Ø BAP18調節哺乳動物細胞中AR介導的轉錄 

    為了系統的研究BAP18在全表觀基因組范圍內影響AR介導的基因調控,應用高通量測序技術對基因敲除實驗中的mRNA表達進行分析。從轉錄組數據,我們在合成雄激素(DHT)處理后的22Rv1細胞中發現609個差異表達基因(DEGS),這些基因通過siRNA對編碼BAP18基因進行部分調控(圖3)。沉默BAP18明顯影響受DHT處理誘導的基因的表達,表明BAP18基因參與調節AR介導的轉錄。

為了進一步檢測在DHT存在和不存在情況下BAP18對多個基因的調節功能是否相似,比較分析了攜帶shBAP18的22Rv1細胞在DHT處理前后的轉錄組數據,發現部分基因與雄激素受體靶基因調控研究中重疊。

在DHT處理前后的 shBAP18細胞中,受雄激素誘導表達發生改變的基因有32個。通過KEGG通路富集分析研究這些差異表達基因主要參與哪些細胞過程,結果表明,差異表達基因主要參與細胞過程,人類疾病,機體穩態平衡等(圖3)。

   

圖3.BAP18增強AR介導的轉錄和沉默BAP18抑制AR靶基因的表達

 

接著利用定量PCR(qPCR)評估BAP18 在AR信號通路中的作用,結果類似于我們所觀察到的熒光素酶活性和RNA-SEQ分析,BAP18的消耗導致12個雄激素受體介導的AR靶基因表達顯著降低,這些基因包括PSA、HPGD, ELOVL5, ITGAV, KLK2, KLK4, ALDH1A3, FKBP5, UBE2C, SLC45A3, FASN、VCL。

  

圖4. 相關基因表達

 

 

 

Ø BAP18 募集與AR靶基因啟動子相關的蛋白MLL1

 

    BAP18 可以和MLL1蛋白亞基互作,研究結果表明,BAP18與MLL1復合物及雄激素受體相互作用對AR介導的轉錄有一定的調控作用。

  

圖5. BAP18和MLL1蛋白亞基互作

Ø BAP18是前列腺癌腫瘤的生長和增殖所必需的

AR信號在前列腺癌CRPC的進展中起著至關重要的作用。研究表明BAP18參與調節AR誘導激活,抑制BAP18導致AR靶基因如PSA、KLK4,UBE2C、slc45a3和FASN的表達顯著降低,這些基因與前列腺癌生長或CRPC的進展緊密關聯。此外,顯微觀察也表明,在22Rv1 LNCaP細胞中敲除BAP18基因,細胞生長受抑制。

  

圖6. 沉默BAP18抑制前列腺癌裸鼠移植瘤的生長

Ø BAP18前列腺癌切片中高度表達

BAP18在臨床前列腺癌的樣品中的表達均高于良性前列腺增生癥(良性前列腺增生癥)。 

 圖7. 臨床前列腺癌標本中BAP18 mRNA和蛋白表達水平

結論

本研究發現BAP18是果蠅實驗系統和哺乳動物細胞中雄激素受體的共激活劑,BAP18參與MLL1 亞組分和AR雄激素反應元件(ARE)AR靶基因募集,通過g組蛋白修飾的變化來調節AR依賴的基因激活。BAP18前列腺癌細胞的增殖和CRPC的進展中起著關鍵的作用,BAP18表達是否可以作為前列腺癌CRPC患者預后和治療的一個潛在的靶點。

 

參考文獻

Sun S, Zhong X, Wang C, et al.

BAP18 coactivates androgen receptor action and promotes prostate cancer progression

[J]. Nucleic Acids Research, 2016.



神马电影dy888影视_情色网站_神马影院午夜